一、核心检测方法与标准

‌主要检测技术‌

‌高效液相色谱法（HPLC）‌：采用C18色谱柱，以乙腈-缓冲液/水为流动相，紫外检测器（210nm波长）定量分析总甜菊糖苷及Reb A纯度。

‌液质联用法（LC-MS/MS）‌：通过质谱监测特定离子对（如Reb A的803→641），实现异构体鉴定及痕量检测，定量限可达0.01%。

‌气相色谱法（GC-FID）‌：检测残留溶剂（甲醇、乙醇）含量，色谱柱选用DB-624，检测限分别为0.5mg/kg和5mg/kg。

‌感官评价法‌：通过甜度倍数测试对比蔗糖溶液判定甜度当量（n值）。

关键检测项目及标准‌

检测项目 标准要求 参考依据

总甜菊糖苷纯度 ≥98%（食品添加剂级） GB 8270-2014

Rebaudioside A ≥75%（常规级）或≥95%（高纯度级） SN/T 3854-2014

重金属（As/Pb） ≤0.1mg/kg（医药辅料级） GB 2760

水分含量 ≤5%（卡氏滴定法） QB/T 5600-2021

二、检测流程与操作要点

‌样品前处理‌

提取：采用乙腈-水（30:70）溶解定容，过滤后进样。

稀释：针对高浓度样品（如口服液），需精密稀释至线性范围内（如1:100）。

‌标准曲线制作‌

使用梯度浓度标准品（0.5-50μg/mL），确保相关系数r²>0.99913。

色谱柱：C18 (250mm×4.6mm, 5μm)

流动相：乙腈-磷酸钠缓冲液（32:68，pH2.6）

流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL

三、技术难点与解决方案

‌异构体分离‌：采用手性色谱柱（如Chiralpak AD-RH）区分Reb A、Stevioside等同分异构体。

‌低浓度检测‌：LC-MS/MS通过多反应监测（MRM）模式提升灵敏度，检测限达0.01μg/mL。

‌溶解性优化‌：酶法糖基化改性后检测水溶性（≥5g/100mL）及与酸味剂配伍性。

四、典型应用场景

‌食品饮料‌：检测甜度当量及与蔗糖的兼容性，避免沉淀产生。

‌医药辅料‌：重点控制重金属及残留溶剂，符合GMP规范。

‌出口贸易‌：依据SN/T 3854-2014验证甜菊双糖苷等特定成分。

五、注意事项

‌标准品验证‌：需采购有资质机构（如Nature Standard）提供的对照品，批号与纯度需明确标注。

‌前处理优化‌：针对基质复杂样品（如口服液），需调整提取溶剂比例以减少干扰。

‌方法验证‌：新方法需通过加标回收率（90-110%）和重复性测试（RSD<2%）验证。

（注：检测方法选择需结合样品特性与检测目的，高精度需求推荐液质联用法）