一、菌种鉴定与分类

‌显微观察法‌

通过光学或电子显微镜直接观察复合菌的菌体结构，识别藻类与真菌的共生形态特征，但需结合其他方法避免误判‌。

分子生物学技术（如PCR、基因测序）可精准鉴定菌株种类，解决形态学鉴定的局限性‌。

‌特异性引物技术‌

采用PMA-qPCR技术筛选特异性引物，通过包容性与排他性验证，区分复合菌中的目标菌种与非目标菌种‌。

二、活菌数量测定

‌传统方法‌

‌平板计数法‌：通过培养菌落形成单位（CFU）统计活菌数，操作简便但耗时长‌。

‌流式细胞术‌：结合荧光染色快速检测活菌数量，适用于高通量分析‌。

‌新型分子检测技术‌

‌PMA-qPCR‌：利用叠氮溴化丙锭（PMA）抑制死菌DNA扩增，通过实时荧光定量PCR精准检测目标菌种活菌数，解决复合菌中多菌种交叉干扰的难题‌。

三、代谢产物与功能评估

‌代谢产物分析‌

使用气相色谱（GC）、液相色谱（HPLC）及质谱联用技术（LC-MS/MS）分析复合菌产生的有机酸、酶类等代谢产物，评估其生物效应‌。

核磁共振波谱法（NMR）可无损检测活体样本中的代谢物三维构象‌。

‌功能验证‌

通过生理生化试验（如色素成分、酶活性检测）验证复合菌的特定功能，如脱氮效率或污染物降解能力‌。

四、安全性检测

‌有害物质筛查‌

检测重金属、病原菌及抗生素残留，确保复合菌剂的环境安全性‌。

采用色谱-质谱联用技术（如GC-MS）筛查毒性降解产物，灵敏度达ppm级‌。

五、标准化与质量控制

‌方法学验证‌

依据国内外标准（如中国食品科学技术学会团体标准）验证检测方法的特异性、灵敏度和重复性‌。

每批次检测需加入空白对照与加标回收实验，回收率控制在80%-120%‌。

‌仪器与流程规范‌

分子检测需定期校准PCR仪和质谱仪，色谱柱效需验证分离能力‌。

样品前处理标准化（如低温保存、冷冻干燥）是保证结果准确性的关键‌。

应用场景与技术适配

‌检测目标‌         ‌                                 推荐方法‌               ‌                     技术优势‌

复合菌种类鉴定                         PMA-qPCR 基因测序            高特异性，区分相近菌种‌

活菌数快速检测 流式细胞术、        PMA-qPCR                            高通量、高灵敏度‌

代谢产物分析                           GC-MS、LC-MS/MS          多组分同步检测，覆盖广谱代谢物‌

技术发展趋势

‌智能化检测‌：AI算法辅助解析色谱-质谱数据，提升复杂样本分析的准确性‌。

‌微流控芯片技术‌：集成多模块实现现场快速筛查，缩短检测周期‌。

‌标准库建设‌：推动复合菌检测标准品库与数据库的建立，提升方法可比性‌。